依据我国《中华人民共和国刑法》第八十七条的明确规定，诽谤罪的追诉时效期限，将依照其法定最高刑进行计算。若是诽谤罪的法定最高刑在幅度较小的五年以下有期徒刑之内，则其追诉时效为五年；若其法定最高刑在五年以上但不满十年的有期徒刑之间，则其追诉时效为十年；若其法定最高刑在十年以上的有期徒刑之上，则其追诉时效为十五年；而对于法定最高刑为无期徒刑或死刑的诽谤罪，其追诉时效则为二十年。若在二十年后仍认为有必要对该诽谤罪进行追诉，则需向最高人民检察院提出申请并获得批准。关于二十年前发生的诽谤罪能否被追究责任，这需要根据当时的具体情况以及相关法律法规进行综合判断。若诽谤罪的法定最高刑在上述所列的范围之内，并且尚未超出相应的追诉时效期限，那么便可依法追究其刑事责任。
然而，若已超过追诉时效期限，根据现行法律规定，通常情况下不会再进行追诉。
然而，若在二十年后仍认为有必要对该诽谤罪进行追诉，则可向最高人民检察院提出申请并获得批准。

《中华人民共和国刑法》第八十七条【追诉时效期限】犯罪经过下列期限不再追诉：
（一）法定最高刑为不满五年有期徒刑的，经过五年；
（二）法定最高刑为五年以上不满十年有期徒刑的，经过十年；
（三）法定最高刑为十年以上有期徒刑的，经过十五年；
（四）法定最高刑为无期徒刑、死刑的，经过二十年。如果二十年以后认为必须追诉的，须报请最高人民检察院核准。”